指標(biāo) |
方法 |
標(biāo)準(zhǔn) |
環(huán)丙沙星 |
高效液相色譜法 |
NY/T 3787-2020 土壤中四環(huán)素類、氟喹諾酮類、磺胺類、大環(huán)內(nèi)酯類和氯霉素類抗生素含量同步檢測方法 |
恩諾沙星 |
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諾氟沙星 |
檢測原理
高效液相色譜法(HPLC)是一種常用的分析技術(shù),特別適合于檢測土壤中的氟喹諾酮類抗生素。這種方法通常結(jié)合固相萃?。?/span>SPE)或其他樣品前處理技術(shù),以提高檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性。
在HPLC檢測中,土壤樣本首先經(jīng)過含有50%乙腈的磷酸鹽緩沖液(pH=3)提取,然后通過SAX-HLB串聯(lián)小柱進(jìn)行凈化富集。之后,在HPLC/MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測模式下進(jìn)行定性及定量分析。這種方法可以有效地分離和檢測土壤中的氟喹諾酮類抗生素。
檢測結(jié)果
當(dāng)添加濃度為200和50 μg/kg的氟喹諾酮類抗生素時,土壤中的加標(biāo)回收率分別為67.2%~89.0%,62.2%~85.4%和55.8%~97.4%。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%~17.2%。以3倍信噪比估算出氟喹諾酮類抗生素的檢出限分別為3.4~8.9 μg/kg,0.56~0.91 μg/kg和0.07~1.85 μg/kg。
基本步驟
在使用HPLC檢測土壤中的氟喹諾酮類抗生素時,需要進(jìn)行樣品前處理步驟,如提取和凈化,以確保準(zhǔn)確的分析結(jié)果。樣品提取后,可以通過HPLC系統(tǒng)進(jìn)行分析,通過色譜柱進(jìn)行分離,最終通過檢測器定量檢測氟喹諾酮類抗生素的含量。
土壤采樣
選擇具有代表性的土壤樣本,避免污染區(qū)域,使用清潔工具采集,并迅速密封存儲,防止樣品變質(zhì)。
樣品前處理
1. 提?。菏褂眠m宜的溶劑(如酸化甲醇、乙腈等)提取土壤中的氟喹諾酮類抗生素,超聲波或渦旋混勻可增強(qiáng)提取效果。
2. 凈化:通過固相萃?。?/span>SPE)、凝膠滲透色譜(GPC)或QuEChERS等方法去除雜質(zhì),減少基質(zhì)效應(yīng)。
3. 濃縮:使用氮吹或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)等方式濃縮提取液,提高目標(biāo)抗生素的濃度。
高效液相色譜分析
1. 色譜條件:選擇合適的色譜柱(如C18反相柱),并優(yōu)化流動相組成(如甲醇-水體系,可能添加緩沖鹽調(diào)整pH)、流速和檢測波長,確保最佳分離效果。
2. 檢測器:通常使用紫外-可見光檢測器(UV/Vis),針對氟喹諾酮類抗生素的特定吸收波長3. 進(jìn)行檢測;也可采用熒光檢測器或串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)提高檢測的靈敏度和特異性。
3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線:使用氟喹諾酮類抗生素標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,用于定量分析。
數(shù)據(jù)分析與驗(yàn)證
1. 定量分析:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中氟喹諾酮類抗生素的濃度。
2. 回收率與精密度測試:通過加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性和可靠性。
3. 結(jié)果報(bào)告:整理分析數(shù)據(jù),撰寫報(bào)告,確保所有結(jié)果的準(zhǔn)確性和完整性。
注意事項(xiàng)
1. 整個分析過程需嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范,防止交叉污染。
2. 定期校準(zhǔn)儀器,確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。
提取過程中使用哪種固相萃取柱
1. SupelMIP SPE:這是一種分子印記聚合物固相萃取柱,它具有極高的選擇性,可以用于提取單個目標(biāo)分析物或一類結(jié)構(gòu)相似的分析物。這種柱在MIP合成過程中模仿目標(biāo)分析物設(shè)計(jì)模板分子,形成的洞穴或印記與目標(biāo)分析物的立體和化學(xué)結(jié)構(gòu)相匹配,從而提供與目標(biāo)分析物相互作用的多種點(diǎn)。
2. HLB固相萃取柱:親水-親脂平衡化學(xué)結(jié)構(gòu)的柱,具有強(qiáng)疏水性,即使干涸,依然對分析物有很好的保留。它在許多有機(jī)溶劑中穩(wěn)定,適合用于提取土壤中藥物代謝產(chǎn)物、肽和寡聚核苷酸、內(nèi)分泌干擾物等。
3. Oasis HLB固相萃取柱:這是一種由親脂性二乙烯苯和親水性Ⅳ-乙烯基吡咯烷酮兩種單體按一定比例聚合成的大孔共聚物,具有較高的吸附容量。與硅膠相比,Oasis HLB吸附劑的表面積增大2—3倍,容量因子提高,對于氟喹諾酮類和四環(huán)素類物質(zhì)的回收率明顯好于其他類型的柱。
最低檢出限
根據(jù)最新的信息,使用直接進(jìn)樣法時,進(jìn)樣體積為5μl,17種氟喹諾酮類抗生素的方法檢出限為2μg/L,測定下限為8μg/L。如果采用固相萃取法,取樣量為1L,定容體積為1.0ml,進(jìn)樣體積為5μl時,17種氟喹諾酮類抗生素的方法檢出限為2ng/L,測定下限為8ng/L。這些數(shù)據(jù)表明,通過固相萃取法可以大大提高檢測的靈敏度,使得檢測極限達(dá)到更低的水平。