花青素廣泛存在于植物的花朵、果實(shí)、莖葉中，賦予植物鮮艷的色彩，如紅、紫、藍(lán)等，同時(shí)也具有抗氧化、抗炎等多種生物活性。
飛燕草色素：可能是指來(lái)源于飛燕草（Delphinium spp.）中的花青素，這類色素通常呈現(xiàn)出鮮艷的藍(lán)色或紫色，是花青素的一種，對(duì)光線敏感，能夠根據(jù)pH值變化而改變顏色。
矢車菊色素：矢車菊（Centaurea cyanus）以其鮮艷的藍(lán)色花朵著稱，其色素也是花青素類，能夠給花朵帶來(lái)醒目的藍(lán)色調(diào)，這類色素在天然染料和食品著色劑中具有潛在應(yīng)用價(jià)值。
矮牽牛色素：矮牽牛（Petunia spp.）花朵顏色豐富，從粉色到紫色再到藍(lán)色，其色素也是花青素類，對(duì)研究植物色素合成機(jī)制有科學(xué)價(jià)值。
天竺葵色素：天竺葵（Pelargonium spp.）花瓣中的色素同樣是花青素，它們可以呈現(xiàn)從粉紅到深紫的各種顏色，這些色素的形成和調(diào)控是植物遺傳學(xué)和分子生物學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。
芍藥素：雖然“芍藥素”作為特定色素名稱可能不太常見(jiàn)，但芍藥（Paeonia spp.）花瓣中的顏色通常由花青素和類黃酮共同作用形成，這些色素賦予了芍藥花朵粉紅、白色、紅色等多種顏色。
錦葵色素：錦葵屬（Malva spp.）植物的花朵色彩豐富，其色素同樣屬于花青素類，能夠賦予花朵藍(lán)色、紫色等顏色，是研究自然界顏色變化和植物色素生物合成的有趣對(duì)象。
檢測(cè)指標(biāo)
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指標(biāo)
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方法
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標(biāo)準(zhǔn)
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樣品要求
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用量/g
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飛燕草色素、矢車菊色素、矮牽牛色素、天竺葵色素、芍藥素和錦葵色素
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高效液相色譜法
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NY/T 2640-2014 植物源性食品中花青素的測(cè)定
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鮮樣
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5
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液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法
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T/NAIA 0147-2022 葡萄酒中6種花青素的測(cè)定
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高效液相色譜法檢測(cè)花青素組分
基本原理
高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是檢測(cè)花青素組分的常用方法，尤其適用于復(fù)雜植物樣品中多種花青素的定性和定量分析。HPLC結(jié)合了高分辨率、高靈敏度和快速分析的特點(diǎn)，能夠精確地分離和檢測(cè)不同類型的花青素。它利用花青素在特定條件下與色譜柱相互作用的特性進(jìn)行分離和測(cè)定。在HPLC方法中，樣品經(jīng)過(guò)前處理后注入色譜柱，通過(guò)流動(dòng)相不同的組成進(jìn)行分離。然后，使用紫外檢測(cè)器檢測(cè)樣品中花青素的峰值，并根據(jù)峰面積和標(biāo)準(zhǔn)曲線的關(guān)系確定含量。
流程概述
樣品準(zhǔn)備
提?。菏紫葟臉悠罚ㄈ缢?、蔬菜、花卉提取物）中提取花青素，常用甲醇、乙醇或乙酸乙酯等溶劑進(jìn)行索氏提取、超聲提取或微波輔助提取。
凈化：提取物可能需要通過(guò)固相萃?。?/span>SPE）、液液萃?。?/span>LLE）或柱層析等方法進(jìn)行純化，去除糖類、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。
高效液相色譜分離
色譜柱選擇：選擇適合分離花青素的色譜柱，如C18反相柱，根據(jù)花青素的極性、分子大小進(jìn)行優(yōu)化。
流動(dòng)相：使用水和有機(jī)溶劑（如乙腈、甲醇）的混合物作為流動(dòng)相，通過(guò)梯度洗脫優(yōu)化分離效果，以實(shí)現(xiàn)不同類型花青素的最佳分離。
檢測(cè)
檢測(cè)器：常用的檢測(cè)器包括紫外/可見(jiàn)光吸收檢測(cè)器（UV/Vis），因?yàn)榛ㄇ嗨卦诳梢?jiàn)光區(qū)域有吸收峰，通常在約520nm附近。質(zhì)譜檢測(cè)器（MS）也可用于提供額外的定性信息。
定量分析：通過(guò)與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品比較，根據(jù)峰面積或峰高進(jìn)行定量分析。HPLC-MS/MS（串聯(lián)質(zhì)譜）則能提供更高特異性和靈敏度的定性與定量分析。
數(shù)據(jù)處理
數(shù)據(jù)分析：使用專業(yè)軟件對(duì)色譜圖進(jìn)行分析，包括峰識(shí)別、積分、校正，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中各花青素組分的含量。
方法優(yōu)勢(shì)
高分辨率：能夠有效分離結(jié)構(gòu)相似的花青素，如不同糖苷化程度的花青素。
高靈敏度：即使是低濃度的花青素也能準(zhǔn)確檢測(cè)。
定性定量準(zhǔn)確：通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比，可以準(zhǔn)確鑒定花青素的種類和含量。
廣泛適用：適用于多種基質(zhì)的花青素分析，包括食品、植物提取物、生物樣本等。
液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)花青素組分
液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）是一種結(jié)合了液相色譜的高分離能力和質(zhì)譜的高靈敏度、高選擇性的分析技術(shù)。
技術(shù)原理
在液相色譜部分，樣品經(jīng)過(guò)處理后以離子化形式分離，因?yàn)楦鞣N不同的離子具有不同的活性，所以它們會(huì)在柱子上分離，并以時(shí)間序列的形式釋放出來(lái)。在質(zhì)譜部分，樣品經(jīng)過(guò)離子化后，會(huì)按照質(zhì)量-電荷比（m/z）比例進(jìn)行分析，以獲得離子質(zhì)量譜圖，從而鑒定出花青素中的碎片。通過(guò)母離子與其碎片離子具有相同色譜行為的特性進(jìn)行母-子離子的關(guān)聯(lián)歸屬，可以得到混合物中的每個(gè)化合物的特定質(zhì)譜圖譜，從而通過(guò)質(zhì)量分析進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)和鑒定。
流程概述
樣品前處理
提?。簭闹参锝M織（如水果、蔬菜、花卉）中提取花青素，通常使用甲醇、乙醇、乙酸乙酯等溶劑，有時(shí)結(jié)合超聲波、微波或索氏提取法提高提取效率。
純化：通過(guò)液液萃?。?/span>LLE）、固相萃取（SPE）或凝膠滲透色譜（GPC）去除脂肪、蛋白質(zhì)、糖類等雜質(zhì)，提高分析的準(zhǔn)確性。
高效液相色譜（LC）分離
色譜柱：選用C18反相柱或其他適合分離花青素的色譜柱，根據(jù)花青素的極性、分子量進(jìn)行分離。
流動(dòng)相：采用梯度洗脫，如水和乙腈/甲醇混合物，優(yōu)化分離條件，確保不同結(jié)構(gòu)的花青素有效分離。
串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS）檢測(cè)
離子化：樣品進(jìn)入質(zhì)譜儀前，通過(guò)電噴霧電離（ESI）或大氣壓化學(xué)電離（APCI）轉(zhuǎn)化為帶電離子。
一級(jí)質(zhì)譜：測(cè)量離子的質(zhì)荷比（m/z），初步篩選目標(biāo)花青素。
二級(jí)質(zhì)譜：選擇感興趣的一級(jí)離子進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離（CID），產(chǎn)生特征碎片離子，用于花青素的精確定性。
數(shù)據(jù)解析：根據(jù)母離子和子離子的質(zhì)譜圖，與數(shù)據(jù)庫(kù)或標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，進(jìn)行花青素的結(jié)構(gòu)鑒定。
定量分析
內(nèi)標(biāo)法：在樣品中加入已知濃度的內(nèi)標(biāo)物，通過(guò)比較待測(cè)花青素與內(nèi)標(biāo)物的響應(yīng)值（如峰面積或峰高），結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量分析。
數(shù)據(jù)處理：使用軟件進(jìn)行峰識(shí)別、積分、校正，生成詳細(xì)的定量報(bào)告。
方法優(yōu)勢(shì)
高靈敏度：能檢測(cè)到極低濃度的花青素，適用于痕量分析。
高特異性：MS/MS技術(shù)提供獨(dú)特的指紋圖譜，減少干擾，精確鑒定花青素種類。
多組分同時(shí)分析：一次性分析樣品中多種花青素，提高分析效率。
結(jié)構(gòu)信息豐富：提供花青素的結(jié)構(gòu)信息，有助于新化合物的發(fā)現(xiàn)和結(jié)構(gòu)解析。
廣泛適用性：適用于食品、藥品、化妝品、植物提取物等多種樣品的花青素分析。
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